山东省荣城市某水貂养殖场共养貂约2 000余只,部分貂突然发病,主要表现为呼吸困难,同时伴有腹泻症状,其发病率为10%,病死率为58%。根据临床症状、病理剖检变化、细菌分离培养及生化试验等综合诊断,确诊为由貂铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌混合感染所致。报告如下。
1 临床症状及病理变化
患病貂精神极度沉郁,体温升高,食欲废绝,呼吸困难,呈腹式呼吸;腹泻,排水样灰白色粪便,味腥臭,后期粪便带血呈黑色;肺充血、肿大,呈暗红色,散在灰白色粟粒状结节,切面有淡红色泡沫状液体流出,支气管黏膜充血;心冠状沟有出血点;脾肿大,有出血斑;胃、肠黏膜脱落,胃壁充血、出血;肠管肿胀,呈现卡他性炎症。多于发病后24 h左右死亡。
2 细菌分离培养
无菌取病死貂肝、心血接种于普通琼脂平板,37℃培养24 h,可见绿色和灰白色两种菌落,挑取两种菌落分别接种于普通琼脂平板和麦康凯琼脂平板上培养,可见绿色菌落在普通琼脂平板上生长良好,表面光滑、湿润、微隆起、圆形中等大小,培养基表面染成青绿色;在肉汤内生长迅速,呈淡绿色,并形成一层菌膜,培养时间稍长,则绿色加深。取细菌染色镜检为革兰氏阴性杆菌(以下简称细菌Ⅰ)。灰白色菌落在麦康凯琼脂平板上长出红色菌落,光滑湿润、边缘整齐,革兰氏染色为阴性小杆菌(以下简称细菌Ⅱ)。
3 生化试验鉴定
(1)细菌Ⅰ生化试验鉴定:该细菌不分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖,分解尿素,能形成硫化氢,靛基质试验、M.R.及V-P试验均为阴性。
(2)细菌Ⅱ生化试验:该细菌能够分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖和山梨醇而产酸产气,不发酵蔗糖、肌醇和卫矛醇,吲哚试验和M.R.试验阳性,V-P试验阴性。根据以上试验,鉴定细菌Ⅰ为铜绿假单胞杆菌,细菌Ⅱ为大肠杆菌。
4 细菌致病性试验
取细菌Ⅰ和细菌Ⅱ 18 h肉汤增菌液分别腹腔接种体重17~22 g小鼠各5只,0.2 ml/只,另取5只小鼠腹腔接种同等剂量的肉汤做对照,24 h内试验组小鼠全部死亡,对照组正常。从死亡小鼠的心血中分别分离到与接种菌特征一致的细菌。
5 药敏试验
选用10种抗菌药物,采用试管液体二倍稀释法进行药物敏感性试验,结果为铜绿假单胞杆菌对恩诺沙星、新霉素较敏感;最小抑菌浓度(MIC)分别为4、16 μg/ml;大肠杆菌对氟苯尼考、恩诺沙星和头孢拉定较敏感;其MIC分别为2、4、16 μg/ml,其他药物都呈现一定程度的耐药性。
6 防治措施
(1)根据药敏试验结果,两种病菌对恩诺沙星都很敏感,治疗时可选用恩诺沙星每克兑水20 kg,每天饮水2次,连饮5~7天,对于拒食的重病貂可人工灌服,每次5~10 ml,每日3次。
(2)采用从死貂中分离的病菌制作甲醛灭活苗及时免疫接种,可以防止疾病的大规模暴发。(3)立即对病貂和有症状的貂进行隔离,及时消毒貂舍,使用全价饲料,加强饲养管理,提高貂的抗病力。
7 小结与讨论
(1)从病死貂的肝和心血中分离到两种细菌,经过分离培养、生化试验鉴定为铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌。绿脓青素为铜绿假单胞杆菌所特有,故普通琼脂平板上生长出绿色菌落即可认为是铜绿假单胞杆菌,但为了进一步证明此菌,我们又做了该菌的生化试验,结果与初步认定结果一致。
(2)实验动物致病性试验结果表明,两种细菌均可使小鼠死亡,说明两种细菌都具有致病性。
(3)从药敏试验看,铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌对多种抗生素都有一定的耐药性,可能与平时滥用药物有关。所以,治疗此类疾病时最好尽早做出正确诊断,并通过药敏试验,选择最敏感药物,才能收到显著的防治效果,避免浪费药物和延误防治时机,减少损失。
(4)貂的铜绿假单胞杆菌感染常有报道,貂的大肠杆菌病也是貂的一种常见病,但铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌同时感染貂还未见报道。由于铜绿假单胞杆菌和大肠杆菌的血清型较多,不同血清型之间交叉保护效果较差,故应采用自家苗进行免疫接种,在实际工作中我门应用此方法,收到了很好的效果。